不同刺激因子组合诱导NK细胞体外扩增及其功能的研究
马杰
赵卫东
张丽娜
周虎
丁玉兰
宣恒华
桂云
金夏
1.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300012.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300013.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300014.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300015.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300016.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300017.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,2300018.安徽医科大学附属省立医院妇产科,合肥,230001
摘要：目的 探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响.方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细胞为30 Gv γ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs),未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基(SCGM)中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56+CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性.结果 经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的(9.2±2.9)%提高到(93.5+3.2)%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异(P＞0.05).细胞扩增倍数分别为17.2+1.7、51.3±6.6和82.4_±9.8倍,均显著高于对照组(5.7±1.2)(P＜0.01).实验组组问比较,C组明显高于A组和B组(P＜0.01).细胞杀伤实验表明,当效靶比为10:1时,各组的杀伤活性显示为C组＞B组＞A组＞对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到(70.1±8.9)%和(64.6±6.2)%,显著高于对照组、A组(P＜0.01)和B组(P＜0.05),对PBMC的杀伤率仅为(4.2±1.2)%.结论 经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激冈子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法.
关键词：自然杀伤细胞扩增饲养细胞刺激因子组合免疫治疗
分类号：R392.33(医学免疫学)
资助基金：安徽省科技攻关课题(08010302101)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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