B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究
王旭
逄越
王惠国
马彪
刘庆平
李文哲
1.大连大学生物工程学院免疫研究所,1166222.大连大学生物工程学院免疫研究所,1166223.大连大学生物工程学院免疫研究所,1166224.大连大学生物工程学院免疫研究所,1166225.大连大学生物工程学院免疫研究所,1166226.大连大学生物工程学院免疫研究所,116622
摘要：目的 克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备.方法 从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的 蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western b1ot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清.利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况.结果 克隆得到的目的 基因片段大小与预期相符,测序结果 与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的 蛋白.Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上.兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1:256 000.免疫荧光染色结果 显示Raji细胞中Pax5高表达.结论 本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据.
关键词：Pax5BSAP原核表达
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30972675)大连市科技计划(2010J21DW011)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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