PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型的建立及应用
王见之
刘朝奇
汪龚泽
覃晓琳
吕佰瑞
1.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430022.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430023.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430024.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430025.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002
摘要：目的 通过构建重组的小鼠pcDNA3.1(+)-PD-L1质粒,并在真核细胞中进行高表达,建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖药物筛选模型用于免疫调节药物的筛选.方法 以RT-PCR方法扩增得到小鼠的PD-L1全长片段;以pcDNA3.1(+)真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-L1;脂质体转染到小鼠成纤维细胞(L929),通过G418筛选得到高表达PD-L1的稳定细胞株并经免疫荧光鉴定;用丝裂霉素处理过的PD-L1高表达细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养;成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型之后向其中加入不同种类、不同浓度的天然产物提取物,并设复孔.结果 通过Eco RI/Xho I双酶切及测序证实构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-PD-LI正确.RT-PCR和免疫荧光方法鉴定重组质粒在L929细胞中高效表达,应用流式细胞术成功建立PD-L1抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的模型,并筛选出阻断PD-L1活性的有效药物.结论 获得了稳定高表达PD-L1的细胞,并且用于免疫调节的药物筛选,为免疫调节药物的筛选奠定了实验基础.
关键词：PD-L1真核表达小鼠脾淋巴细胞药物筛选
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：湖北省自然科学基金资助项目(2008CDB118)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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