具有中和活性的抗人IL-1β单链抗体的构建
李宁
徐黎明
李天鹤
任桂萍
陈睿
张宇
阚方明
叶贤龙
谷学佳
丁良君
李德山
1.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500302.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500303.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500304.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500305.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500306.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500307.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500308.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,1500309.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,15003010.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,15003011.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室,哈尔滨,150030
摘要：目的 构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1β scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测.方法 使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载体pET-27b-hIL-1β scFv.将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后诱导表达,经凝胶过滤色谱柱上复性得到可溶的抗人IL-1β的scFv蛋白.使用ELISA方法鉴定scFv抗体的特异性结合活性,使用Real time-PCR的方法检测scFv抗体的中和活性.结果 成功地对抗人IL-1β单链抗体进行诱导、表达和复性,蛋白相对分子质量约为28 000.ELISA结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力.Real time-PCR实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断人IL-1β刺激人T细胞表达细胞因子IL-18及IL-1β的作用.结论 通过原核表达系统得到的抗人IL-1β单链抗体经复性后,与人IL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和活性,为进一步研究人IL-1β相关疾病及其治疗性抗体奠定了基础.
关键词：IL-1β单链抗体包涵体复性中和活性Realtime-PCR
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：哈尔滨市科技创新人才发展计划(2006RFXXS002)东北农业大学创新团队发展计划(CXZ001-1)哈尔滨市科技创新人才研究专项(2010RFQXN109)国家自然科学基金(31001084)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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