经点突变的花生主要过敏原Ara h2低致敏原的制备与鉴定
易海涛
刘志刚
刘芳
闫浩
汤慕谨
曹小勇
夏立新
1.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180602.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180603.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180604.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180605.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180606.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,5180607.深圳大学过敏反应与免疫学研究所,518060
摘要：目的 构建经点突变的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性.方法 将Ara h 2基因进行点突变,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入B121(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的 蛋白;Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的过敏原性.结果 测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的 蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果均表明经点突变的Ara h 2蛋白(M-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低.结论 成功构建了经点突变的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原的潜能.
关键词：花生过敏原Ara h 2点突变低致敏
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30871752)深圳出入境检验检疫局科技项目(SZ2008105)深圳市深港创新圈项目(200904)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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