结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达、鉴定及抗血清的制备
佘茜
徐蕾
何永林
靳志栋
张丹
杨春
1.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,4000162.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,4000163.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,4000164.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,4000165.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,4000166.重庆医科大学病原生物学教研室神经科学研究中心重庆神经生物学重点实验室,400016
摘要：在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,鉴定并纯化重组rPPE68蛋白后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PPE68多克隆抗体.方法将已经过鉴定的重组原核表达质粒pET32a (+)-PPE68转化至大肠杆菌BI21中,IPTG诱导大量表达PPE68蛋白.对表达蛋白进行鉴定后利用亲和层析法进行纯化.以纯化后重组rPPE68为免疫抗原,与弗氏不完全佐剂等体积混合,采用皮下多点注射法免疫新西兰大白兔,于第3次免疫后的第7天采血.用凝集实验与Western-blot检测抗血清的特异性,并用双向免疫扩散法测定抗血清效价.结果在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量57 000处可见特异性条带,免疫印迹分析证实表达的目的蛋白可与结核分枝杆菌H37Rv株感染小鼠的血清发生反应.纯化的rPPE68蛋白免疫新西兰大白兔后,凝集反应与Western-blot证实了抗血清的特异性,双向免疫扩散法测得血清效价为1∶16.结论已成功表达结核分枝杆菌PPE68蛋白,制备了特异性兔抗PPE68多克隆抗体,对结核病的早期诊断提供了一种新的思路.
关键词：结核分枝杆菌PPE68原核表达抗血清
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30771922)重庆市自然科学基金(2009BB5275)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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