果蝇jumeaux蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
郝阳光
张晴
金丽华
1.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,1500402.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,1500403.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,150040
摘要：目的 原核表达及纯化重组果蝇jumeaux(jumu)蛋白,制备大鼠抗果蝇jumu多克隆抗体.方法 用RT-PCR方法扩增jumu基因,并将其克隆到原核表达载体pRSETA中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导His-jumu融合蛋白的表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及蛋白表达的特异性后,用Ni-NTA亲和层析柱纯化带有6×His标签的融合蛋白,用纯化后的蛋白免疫SD大鼠制备多克隆抗体.以Western blot、免疫荧光染色法鉴定抗体的特异性,并用制备的抗体检测jumu在果蝇不同器官中的表达情况.结果 成功构建了pRSETA-jumu原核表达质粒,jumu融合蛋白在大肠杆菌内高表达并纯化,免疫SD大鼠得到抗jumu多克隆抗体.用Western blot和免疫荧光染色检测发现制备的抗体有较强的特异性,并能检测内源性蛋白.通过免疫荧光染色发现jumu的表达存在组织特异性,且在唾液腺中的表达量最高.结论 成功获得了抗jumu蛋白的特异性抗体,为进一步研究jumu蛋白的功能和作用机制奠定了基础.
关键词：jumu蛋白多克隆抗体免疫荧光染色基因功能
分类号：Q352(遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30940063)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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