利用巢式PCR扩增目的基因构建hsa-miR-200c真核表达载体及鉴定
陈登宇1
陈峻崧1
王净2
曹文虎1
张洪义1
杨翠萍1
窦骏1
1.东南大学医学院病原生物学与免疫学系,南京,2100092.东南大学附属中大医院妇产科,南京,210009
摘要：目的 用巢式PCR从人类基因组获取miR-200c及侧翼序列,构建hsa-miR-200c重组体,转染卵巢癌细胞系SKOV3,检测其对E-钙粘蛋白表达的影响,为miR-200c对肿瘤细胞基因表达调控奠定基础.方法 据microRNA数据库设计人miR-200c及侧翼引物,提取人细胞基因组进行PCR和巢式PCR获得miR-200c及侧翼共307个碱基序列,连接到pIRES2-EGFP载体中,测序鉴定后再将的miR-200c基因经慢病毒载体系统转染SKOV3细胞,检测miR-200c过表达对卵巢癌细胞E-钙粘蛋白表达的影响.结果 成功扩增出miR-200c及侧翼共307个碱基序列,构建的重组体pIRES2-EGFP-miR-200c测序正确,转染SKOV3细胞后miR-200c过表达引起E-钙粘蛋白表达增多.结论 巢式PCR技术能有效地从基因组中扩取miR-200c及侧翼片段用以构建miR-200c表达载体,miR-200c过表达可引起卵巢癌SKOV3细胞E-钙粘蛋白表达增多,可能导致细胞间黏附性增高.
关键词：巢式PCRmiR-200c卵巢癌SKOV3细胞
分类号：R737.31(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81071769)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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