人补体受体1型SCR1-3功能域基因的克隆表达及生物活性鉴定
杨绍俊
张璇
汪正清
1.第三军医大学基础医学部微生物教研室重庆市微生物工程实验室,重庆,4000382.第三军医大学基础医学部微生物教研室重庆市微生物工程实验室,重庆,4000383.第三军医大学基础医学部微生物教研室重庆市微生物工程实验室,重庆,400038
摘要：目的 实现人补体受体1型功能域SCR1-3基因的克隆、表达及生物学活性鉴定.方法 从人外周血中提取总RNA,通过逆转录获得cDNA,PCR扩增获得编码CR1-SCR1-3基因序列；克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-CR1-SCR1-3,菌落PCR、双酶切鉴定后测序；线性化重组质粒电转化毕赤酵母KM71基因组中,经菌落PCR技术筛选在G418平板上生长的多拷贝阳性转化子；摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白表达；镍柱亲和层析纯化目的蛋白；用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性.结果 获得了人CR1-SCR1-3编码区序列,测序结果与与GenBank中的相应序列一致；SDS-PAGE和Western-blot表明目的基因在毕赤酵母中实现了分泌表达；体外实验证实经纯化后的CR1-SCR1-3能够明显抑制补体溶血.结论 成功构建重组表达质粒pPIC9K-CR1-SCR1-3,在毕赤酵母中实现了CR1-SCR1-3的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体生物活性.
关键词：人补体受体1型毕赤酵母分泌表达补体抑制活性
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30471723)重庆市自然科学基金(2007BB5011)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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