RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定
左斌
王欢
王海斌
曾鸣
任来峰
李莎
郭莲娣
李明远
1.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室2.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室3.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室4.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室5.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室6.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室7.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室8.610041成都,四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,第二医院发育与干细胞研究所;563000,遵义医学院微生物学教研室
摘要：目的 原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础.方法 以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性.结果 在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带.结论 成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础.
关键词：RPA32原核表达多克隆抗体复制蛋白A
分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81071362)中央高校基本科研业务费专项(C-588e;2010SCV21004)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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