Slug基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
钱江
傅仲学
文坤明
陈旺盛
1.重庆医科大学附属第一医院普通外科,4000162.重庆医科大学附属第一医院普通外科,4000163.重庆医科大学附属第一医院普通外科,4000164.重庆医科大学附属第一医院普通外科,400016
摘要：目的 构建Slug基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体.方法 针对人Slug基因的序列,设计出RNA干扰的靶序列,合成靶序列Oligo DNA,退火形成双链DNA,通过AgeI和EcoR 1酶切后的pGCSlL-GFP载体连接产生shRNA慢病毒载体,质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆并用插入鉴定引物进行PCR鉴定阳性克隆并测序,同时应用Realtime PCR和Western blot方法检测HCT116结肠癌细胞中Slug基因mRNA和蛋白的表达情况.结果 PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Slug shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确.Western blot证实Slug RNAi慢病毒载体能够抑制Slug的表达.结论 成功构建Slug基因RNAi慢病毒表达载体,为后续感染结肠癌细胞,为探索在结直肠癌发生和发展中的作用奠定基础.
关键词：RNA干扰Slug慢病毒载体
分类号：R735.3(消化系肿瘤)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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