全人源抗人干扰素α1b基因工程抗体与抗原的结合表位鉴定
龚斌1
梁米芳2
1.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,1000522.广西钦州学院海洋学院,535000
摘要：目的 鉴定抗原人干扰素α1b(huIFN-α1b)与1株全人源抗体蛋白AIFNa1IgG1的结合表位.方法 从正常人分离纯化淋巴细胞并抽提mRNA进行CDNA合成,以CDNA为模板通过PCR扩增得到huIFN-α1b基因,通过重叠延伸PCR法构建huIFN-α1b蛋白29-35位氨基酸残基缺失突变体及点突变体,野生型和突变基因与载体pET30a连接构建重组表达载体,将以上重组表达载体转化大肠杆菌表达宿主E.coli Rosseta(DE3),诱导表达后的huIFN-α1b蛋白及突变体通过Western blot分析其与全人源抗huIFN-α1b基因工程抗体蛋白的结合活性.结果 huIFN-α1b蛋白在E.coli Rosseta (DE3)细胞中成功表达,Western-blot分析表明野生型huIFN-α1b蛋白与抗体结合,29-35位氨基酸缺失与抗体失去结合活性,其中27位的Ser,33位的Asp,34位的Arg,35的His,36位的Asp突变为Gly后,抗体与huIFN-α1b的结合可减弱到不可检测的水平.结论 huIFN -α1b蛋白29-35位氨基酸形成的表位是与抗体AIFNa1IgG1结合的重要表位.
关键词：抗体全人源抗体人干扰素α1b表位重叠延伸PCR
分类号：R392.2(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2006AA02A252)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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