重组纳米级粉尘螨变应原第1组分的制备及其在哮喘小鼠中的作用研究
马桂芳
周鹰
王运刚
杨李
崔玉宝
1.盐城卫生职业技术学院检验医学教研室,2240062.盐城卫生职业技术学院检验医学教研室,2240063.盐城卫生职业技术学院检验医学教研室,2240064.盐城卫生职业技术学院检验医学教研室,2240065.盐城卫生职业技术学院检验医学教研室,224006
摘要：目的 应用基因工程技术获得纳米级粉尘螨变应原第1组分s-layer/Der f 1,建立重组纳米级变应原的方法.方法 利用S-layer/Strep-tag Ⅰ这一具有自我组装能力的纳米模式母体嵌合粉尘螨变应原第1组分,并置大肠杆菌中表达,用分离纯化获得的表达产物免疫治疗哮喘小鼠,从分子、细胞、组织和器官4个层面证实该重组变应原诱导哮喘小鼠免疫耐受的可能性和有效性.结果 采用基因工程技术将球形芽孢杆菌S层蛋白编码基因sllB的3'端去除600 bp后与尘螨主要变应原第1组分Der f 1连接,5'端与Strep-tag Ⅰ的编码基因连接,成功构建克隆质粒pMD 19-T-Strep-tag Ⅰ/sllB1-2706bh/Der f 1,测序正确后,成功构建表达质粒pET28a(+)-Strep-tag Ⅰ/sllB1-2 706 bp/Der f 1并转化E.coli BL21诱导表达,透射电镜显示该表达产物rDer f 1/S-layer 位于工程菌表面,平均粒径为(116.43+14) nm.用获得的重组变应原rDer f 1、rDer f 1/S-layer免疫治疗哮喘小鼠,证实其可改善小鼠肺部炎症,降低支气管肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和总IgE、螨特异性IgE水平,增加总IgG、螨特异性IgG水平,并上调外周血Th1型、下调Th2型细胞因子表达水平,并以重组纳米级变应原疗效更好,免疫调节作用更强.结论 获得了纳米级粉尘螨变应原第1组份重组体,该制品可以诱导哮喘小鼠免疫耐受,具有较强的免疫原性,所建立的纳米级变应原原核表达体系为生产纳米药物和疫苗提供了一个新的途径.
关键词：变态反应变应原免疫治疗粉尘螨纳米
分类号：R562.2+5(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(30660166)盐城市科技发展项目(YK2008079)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息