人源抗人干扰素α1b全抗体在昆虫细胞中的表达、纯化和鉴定
龚斌1
李川2
梁米芳2
1.广西钦州学院海洋学院,5350002.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100052
摘要：目的 克隆、杆状病毒/昆虫表达系统表达人源抗人干扰素α1b(huIFN-α1b)全抗体基因,获得全抗体蛋白.方法 利用PCR技术以gⅢ-scFv融合表达的噬菌粒质粒为模板,分别克隆了5株抗体基因的轻链和重链；经Nco Ⅰ/XhoⅠ和Sac Ⅰ/Hind Ⅲ 分别酶切,与经过相同酶切的pAC-K-CH3载体连接构建了昆虫细胞sf9表达载体pAC-K-CH3-H-L;经测序鉴定正确后,转染进入昆虫细胞sf9进行异源表达.采用免疫荧光(IFA)和ELISA对全抗体的表达和结合情况进行初步鉴定.采用Protein-A亲和层析柱对收获的全抗体IgG蛋白进行纯化,将纯化后的抗体蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定.结果 成功扩增了人源抗人干扰素α1b抗体轻链和重链基因；免疫荧光(IFA)鉴定表明5株重组质粒在昆虫细胞sf9表达出了全抗体蛋白,ELISA鉴定表明其中3株与hulFN-α1b特异性结合；经Protein-A亲和层析柱纯化后每升细胞培养上清收获了5～20 mg的蛋白,Western blotting鉴定表明3株纯化的全抗体蛋白和huIFN-α1b特异性结合.结论 通过杆状病毒/昆虫表达系统获得了3株人源抗人干扰素α1b(huIFN-α1b)全抗体蛋白.
关键词：杆状病毒/昆虫表达系统人干扰素α1bIgG全抗体表达纯化
分类号：R392.2(医学免疫学)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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