人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定
屈芫
魏钦俊
姚俊
鲁雅洁
王天明
曹新
冯振卿
1.南京医科大学2.南京医科大学3.南京医科大学4.南京医科大学5.6.南京医科大学
摘要：目的 构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定.方法 从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库.分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附一洗脱一扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆Fabc2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定.结果 构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆.选取的Fabc2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合.结论 成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆.hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础.
关键词：人催乳素受体抗体Fab’段人源化抗体
分类号：R446.62(诊断学)
资助基金：国家自然科学基金(81172142)江苏省自然科学基金(BK2008442)南京医科大学科技发展基金(08NMU2007)中国博士后科学基金(20080431115)江苏省博士后科研项目(0801018C)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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