病毒介导的P53低表达HepG2细胞株的建立
刘佳1
张俊磊2
李庆伟3
韩俊峰4
徐小峰5
王嘉丽6
陈炜2
饶贤才2
李国利7
1.重庆医科大学实验教学管理中心,4013312.第三军医大学基础部微生物学教研室, 重庆,4000383.诸城市人民医院呼吸内一科,2622004.第三军医大学全军免疫学研究所, 重庆,4000385.第三军医大学医学遗传学教研室, 重庆,4000386.第三军医大学生理学教研室, 重庆,4000387.重庆三峡医药高等专科学校,404120
摘要：目的 构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株.方法 合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰效果；选择干扰效果最好的重组质粒转染PT67细胞进行病毒包装,获得逆转录病毒颗粒感染HepG2细胞,通过Hygromycin筛选获得多个细胞克隆,Western blot检测P53蛋白的表达情况；选择P53表达水平最低的细胞克隆.通过5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡实验,检测P53低表达的HepG2细胞p53通路介导的细胞凋亡情况.结果 经酶切和测序验证成功构建重组病毒载体；瞬时转染HepG2细胞后P53 mRNA表达下调；病毒颗粒感染HepG2细胞后P53的mRNA、蛋白表达下调；用5-FU处理后P53低表达HepG2细胞凋亡水平明显低于对照.结论 成功构建了干扰P53的逆转录病毒载体,建立了P53低表达HepG2细胞株,明显阻断了P53通路依赖的细胞凋亡.
关键词：逆转录病毒P53HepG2RNA干扰细胞凋亡
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30800983)重庆市自然科学基金(2008BB5113)重庆市卫生局医学科研项目(2011-2-411)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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