抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用
倪二茹
曾凡伟
王生育
曹畅
吕莎
张海鹏
颜江华
1.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610052.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610053.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610054.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610055.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610056.厦门大学医学院抗癌研究中心,3610057.厦门大学医学院抗癌研究中心,361005
摘要：目的 鉴定抗人神经菌毛素1 (neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况.方法 腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况.结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力最强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面.细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7 、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823,H6 、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达.结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础.
关键词：NRP1单克隆抗体特异性NRP1的表达免疫细胞化学染色
分类号：R392.9(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30973485)福建省省属公益类科研专项(2011R1039-1)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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