果蝇polycomblike蛋白多克隆抗体的制备及纯化
张晴
汪晓纯
金丽华
1.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,1500402.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,1500403.东北林业大学生命科学学院遗传学科,哈尔滨,150040
摘要：目的 构建、表达并纯化polycomblike(Pcl)6×His融合蛋白,制备该融合蛋白的大鼠多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体.方法 通过PCR反应从野生型果蝇W1118成虫cDNA中扩增Pcl基因部分片段,构建pRSETA-Pcl重组质粒.重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,Ni-NTA superflow层析柱纯化该融合蛋白,Western-blotting分析检测.用纯化的融合蛋白免疫SD大鼠,制备抗Pcl的多克隆抗体,溴化氰活化琼脂糖凝胶4B偶联法纯化多克隆抗体,Western-blotting检测该抗体的效率及特异性.结果 成功构建原核表达质粒pRSETA-Pcl,大量表达并纯化Pcl融合蛋白.免疫大鼠获得多克隆抗体并纯化,Western-blotting及免疫组织化学染色结果表明该抗体可以检测Pcl全长蛋白及内源性蛋白.结论 本研究获得了纯化的Pcl融合蛋白,成功制备并纯化了特异性较高的抗Pcl多克隆抗体,为进一步研究Pcl基因的功能奠定了基础.
关键词：果蝇Pcl蛋白原核表达多克隆抗体
分类号：Q352(遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30940063)中央高校基本科研业务费专项(DL09DAQ01)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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