耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究
蔡昌芝
左钱飞
冯强
周维英
吴翼
董衍东
解庆华
邹全明
曾浩
1.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000384.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000385.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000386.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000387.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000388.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,4000389.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的 探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用.方法 利用生物信息学技术预测分析出 IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原桉表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白、用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究.结果 重组质粒经过BamH Ⅰ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2 蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合.用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6％ 、50％和60％.结论 成功构建重组表达载体pGEX-6P -2- IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础.
关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段GST融合蛋白免疫保护性
分类号：R378.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：重庆市自然科学基金(2008BB5114)国家自然科学基金(81172892)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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