大鼠siTLR4重组腺病毒载体的构建及功能鉴定
张赟
毕杨
龚敏
江伟
魏小平
李廷玉
陈洁
1.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000142.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000143.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000144.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000145.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000146.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,4000147.重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室 重庆市(儿重发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地,400014
摘要：目的 构建特异性针对大鼠TLR4基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究TLR4在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础.方法 设计并合成3对大鼠TLR4基因的siRNA序列,退火处理后定向克隆到pSES-HUS穿梭质粒中,获得pSES-HUS siTLR4,经Pme Ⅰ线性化后与pAdEasy-1骨架质粒在BJ5183细菌中进行同源重组,从而构建pAd-siTLR4质粒,通过脂质体转染,在HEK293细胞中包装形成Ad-siTLR4腺病毒颗粒,用该病毒感染PC12细胞,从基因和蛋白质水平分别检测3对siTLR4的抑制效果,同时从蛋白质水平检测TLR4 下游关键分子NF-κB的表达.结果 PCR、酶切和测序均证实目的基因正确克隆到所构建的pAd siTLR4重组腺病毒载体中;经包装获得的Ad -siTLR4病毒颗粒在PC12细胞中能够有效地抑制TLR4 mRNA和蛋白水平的表达,并显著地降低了NF- κB的表达.结论 成功构建了pAd-siTLR4重组腺病毒质粒,同时包装获得了 Ad -siTLR4重组腺病毒,转染PC12细胞后不仅能明显降低TLR4的表达,而且有效地抑制了TLR4通路下游关键分子NF-κB的表达.
关键词：TLR4siRNA重组腺病毒载体NF-κB免疫调节
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30872670)重庆市卫生局重点项目(2009-1-41)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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