东方马脑炎病毒VLPs表达与免疫原性研究
马金柱1
王化磊2
郑学星2
吴红霞2
高玉伟2
张志芳3
杨松涛2
夏咸柱4
1.130122长春,军事医学科学院军事兽医研究所;163319大庆,黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;150030哈尔滨,东北农业大学动物医学学院2.130122长春,军事医学科学院军事兽医研究所3.100081北京,中国农业科学院生物技术研究所4.130122长春,军事医学科学院军事兽医研究所;150030哈尔滨,东北农业大学动物医学学院
摘要：目的 表达东方马脑炎病毒(EEEV)病毒样粒子(VLPs),研究其免疫原性.方法 采用PCR方法扩增目的基因,酶切之后连接到供体质粒pFastBacTM1上,构建成重组质粒pFastBacTM1-C-E,然后重组质粒经过基因重组作用与家蚕核型多角体病毒(BmNPV)形成重组病毒BmNPV-C-E,BmNPV-C-E被转染到BmN细胞后以表达VLPs.VLPs鉴定表达正确后,用纯化VLPs与弗氏佐剂乳化成免疫原免疫小鼠,免疫剂量为15μ/只,免疫途径为后肢肌肉注射,免疫2次且间隔时间为14d.2免后第7天检测免疫小鼠外周血中CD4+T细胞/CD8+T细胞比例和细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α含量,2免后第14天采用ELISA方法检测免疫小鼠血清内抗体IgG效价.结果 研究结果显示实验组小鼠的CD4+T细胞/CD8+T细胞比例和细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α质量浓度与对照组相比差异均显著(P＜0.01),免疫原实验组和VLPs免疫组2免后的血清效价分别为1∶128与1∶64,而对照组小鼠血清中没有产生IgG抗体.结论 结果表明BmNPV-C-E能在BmN细胞中成功表达EEEV VLPs,并且VLPs能够刺激小鼠产生明显免疫反应,具有较强免疫原性,这为EEEV新型疫苗研究提供了重要参考.
关键词：东方马脑炎病毒载体构建病毒样粒子免疫原性
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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