二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定
张晋霞
姜浩武
亢中奎
潘磊
王金胜
刘羿辰
邓宁
1.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室2.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室3.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室4.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室5.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室6.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室7.510632广州,暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室
摘要：目的 为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性.方法 将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化.间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用.结果 成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1％甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L.SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右.通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95％以上.ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合.CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4％.划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移.结论 研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性.
关键词：bFGFds-Diabody毕赤酵母肺癌细胞
分类号：R392.11(医学免疫学)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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