日本七鳃鳗IL-17基因原核表达、蛋白纯化及多抗制备与鉴定
刘爽1
唐玉林2
逄越1
李庆伟1
1.116029 大连,辽宁师范大学生命科学学院2.116622,大连大学生命科学与技术学院
摘要：目的 从日本七鳃鳗(Lampetra japonica,Lj)类淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗IL-17基因,并对其氨基酸序列进行分析.方法 将IL-17基因连接到原核表达载体pET-28a上,成功构建了重组表达质粒pET-28a-Lj-IL-17;经IPTG诱导表达并纯化重组Lj-IL-17蛋白.用重组Lj-IL-17蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体进行ELISA与Westernblot检测.结果 经ELISA检测抗体效价为1:512 000,Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性结合重组和天然IL-17蛋白.流式细胞实验证明该多抗能特异识别七鳃鳗类淋巴细胞表达的IL-17分子.结论 重组Lj-IL-17蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为研究日本七鳃鳗适应性免疫起源与进化提供了重要的工具.
关键词：日本七鳃鳗IL-17原核表达多克隆抗体
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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