抗骨肉瘤细胞系MG63特异性单链抗体的制备及功能鉴定
谢柏臻1
姚琴2
华强1
赵慧毅1
1.361004,厦门大学附属中山医院脊柱外科2.361004,厦门大学附属中山医院中心实验室
摘要：目的 从全人源噬菌体抗体库中筛选与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的单链抗体(scFv)并进行表达、纯化及鉴定.方法 采用噬菌体表面展示技术,以正常人成骨细胞系hFOBl.19为阴性筛选细胞,人骨肉瘤细胞系MG63为阳性筛选细胞,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体,ELISA检测并进行PCR扩增及测序鉴定.获得的阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导后经镍亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定表达、纯化效果,ELISA检测可溶性特异性单链抗体的亲和力、特异性及稳定性.MTr法检测纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响.结果 通过筛选、PCR扩增和序列分析确定scFv4的片段包含免疫球蛋白序列,其表达产物可与抗原结合;纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖有明显的抑制作用,且其抑瘤作用与质量浓度成正相关.未加蛋白保护剂的纯化抗体4℃下其抗体活性可保持约5周,添加蛋白保护剂的纯化抗体则可在4℃下保持6～7周.结论 利用噬菌体表面展示技术成功筛选出能与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的scFv,在大肠杆菌中成功表达并获得基因序列,抗体能抑制MG63细胞的增殖且稳定性良好.
关键词：噬菌体抗体库单链抗体可溶性表达骨肉瘤细胞MG63
分类号：R730.5(一般性问题)
资助基金：福建省自然科学基金青年创新项目(2010D017)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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