可复制型抗乙肝免疫基因治疗剂pSVK-HBVE的构建与表达
侯沙沙1
高燕2
王宇2
武帅2
朱晓明2
郭炳冉3
张巍2
徐元基2
阎瑾琦2
1.100850北京,军事医学科学院基础医学研究所;273165,曲阜师范大学生命科学学院;100044,北京交通大学理学院2.100850北京,军事医学科学院基础医学研究所3.273165,曲阜师范大学生命科学学院
摘要：目的 构建能同时表达抗体小分子靶向干扰素(dsFvα)和人白介素12(hIL-12)的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒pSVK-HBVE.方法 将pVAX-HBVE质粒双酶切,回收dsFvα-IRES-hIL12片段;将dsFvα-IRES-hIL12片段克隆入早期构建的pSVK载体,得到重组质粒pSVK-HBVE.将重组质粒瞬时转染到293T细胞,ELISA法检测目的基因表达;提取重组质粒pSVK-HBVE,注射乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转基因小鼠体内HBV基因拷贝数的变化.结果 pSVK-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pSVK-HBVE 30 μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级.结论 成功构建能够同时表达抗体靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒,为慢性乙肝免疫基因治疗提供新的备选方案.
关键词：乙肝复制型dsFvIFN-αhIL-12
分类号：R730(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(31100655)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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