靶向bFGF与FGFR1Ⅲc结合位点的单克隆抗体制备及其生物学活性研究
罗镇明
龚隆财
杨雁青
李雨蒙
黄建芳
宋其芳
王宏
1.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室2.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室3.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室4.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室5.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室6.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室7.510632广州,暨南大学生命科学与技术学院分子免疫与抗体工程重点实验室
摘要：目的 针对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与成纤维生长因子受体1c(FGFR1Ⅲc)的结合位点,制备鼠抗人bFGF单克隆抗体并研究其生物学活性.方法 用重组表达的人bFGF免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏常规融合制备杂交瘤细胞,通过间接和竞争ELISA筛选出与FGFR1Ⅲc有共同结合位点的抗bFGF单抗.制备小鼠腹水并利用Protein G亲和柱纯化腹水单抗,SDS-PAGE鉴定纯化产物;间接ELISA测定单抗亚类、亲和常数,竞争ELISA测定抗体IC50; Western blot和免疫荧光对单抗的生物学活性初步鉴定;CCK-8法检测单抗对肺癌细胞株LL/2的增殖抑制活性.结果 筛选出了2株稳定表达bFGF抗体的细胞株MabE12和MabD9,竞争ELISA测得其IC50分别为1.564和1.96 μg/ml,免疫球蛋白分类两者均为IgG1,间接ELISA测得MabE 12的亲和常数为5.66×108L/mol; Western blot和免疫荧光表明该抗体能与LL/2细胞内天然合成的bFGF相结合,并对其增殖产生了较明显的抑制作用.结论 成功建立了1株能特异性识别bFGF-FGFR1Ⅲc合位点的单抗,能有效的中和bFGF对肺癌细胞株LL/2促增殖作用,为研究肿瘤治疗途径奠定了基础.
关键词：bFGFFGFR1Ⅲc单克隆抗体肺癌
分类号：R730.3(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(81202449)广东省科技计划(2012B010300016)国家级大学生创新创业训练计划项目(201410559069)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息