蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立
孙亮
于志新
赵风强
谢鹤
韩金乐
叶祥忠
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摘要：目的 研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,用于生物制品中蛋白酶K的检测.方法 用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密性和准确性.结果 经免疫、融合、克隆、筛选到稳定分泌蛋白酶K单抗的杂交瘤细胞.获得1株阻断蛋白酶K活性的单抗5G6,以5G6为包被抗体、4D3为酶标抗体,构建蛋白酶K定量检测的ELISA方法.本方法线性相关系数R=0.99,线性范围为293.4～2 500 pg/ml;定量限度为293.4 pg/ml;变异系数为CV＜ 15％;回收率介于89.3％～129.2％之间,37℃6d的回收率＞80％;与蛋白酶K以外的其他蛋白无交叉反应.结论 获得阻断蛋白酶K活性的单抗,构建出灵敏、特异的蛋白酶K定量检测方法.
关键词：蛋白酶K单克隆抗体双抗体夹心ELISA
分类号：R392.33(医学免疫学)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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