抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
姜海蓉1
彭方毅2
刘明怀3
李艳景3
蔡宏3
左仪3
杨海艳3
王建霞4
1.重庆理工大学药学与生物工程学院,4000542.400054,重庆理工大学药学与生物工程学院;408300,重庆市垫江县中医院检验科3.重庆市垫江县中医院检验科,4083004.北欧生物科技(北京)有限公司,102206
摘要：目的 制备抗3-硝基酪氨酸(3-NT)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性.方法 用化学合成方法将3-NT与OVA用戊二醛偶联合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白(3NT-G-OVA)作为免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,扩大培养并对抗体进行免疫学鉴定与分析.结果 获得1株稳定分泌抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗亚型为IgG2a;纯化后的抗体效价为1∶(6.14×106);单抗亲和力常数为7.81×107 (L·mol-1);Western blot检测证明该单抗与含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特异地结合.结论 制备了1株具有较高免疫学活性和特异性的抗3-NT单克隆抗体,并可用于Western blot检测病人样本中的蛋白硝基化水平.
关键词：3-硝基酪氨酸单克隆抗体间接ELISAWestern blot
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30571714)国家自然科学基金(60873103)重庆市科委自然基金(2008BB5331)重庆市科委自然基金(2009BB7231)重庆市卫生计生委科研项目(2012-2-383)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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