缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究
陈鉴华1
严思1
李小波2
金小宝2
朱家勇2
潘德顺1
1.广东药学院药理系, 广州,5100062.广东省生物活性药物研究重点实验室
摘要：目的 构建、表达和纯化缺乏第4外显子的IL-7剪接变异体IL-7δ4(interleukin-7 splice variant lacking exon4,IL-7δ4),并对其生物活性进行初步研究.方法 将TA克隆成功的IL-7δ4基因克隆至pET-21b载体中,构建pET-21b-IL-7δ4的原核表达载体,阳性克隆经测序正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IL-7δ4重组蛋白的表达、复性、纯化、Western blot法鉴定,分析其对外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2表达及凋亡的影响.结果 成功构建重组原核表达质粒pET-21b-IL-7δ4,表达蛋白的相对分子质量为12 400,与预期大小一致;复性效率较高(约65％),纯化后获得的蛋白纯度大于95％,Western blot证实其为rhIL-7δ4;与对照组比较,rhIL-7δ4能明显诱导外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,并抑制其凋亡(P＜0.01).结论 成功表达高纯度且具有生物活性的rhIL-7δ4复性蛋白,它能明显上调外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,起抑制PBMCs凋亡作用.
关键词：rhIL-7δ4剪接变异体表达纯化活性鉴定
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：中国-意大利科技合作项目(200625)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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