H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗的构建与鉴定
范艳
杨蓉
樊卫平
陈武娟
申晓贺
1.山西医科大学微生物免疫学教研室,太原,0300012.山西医科大学微生物免疫学教研室,太原,0300013.山西医科大学微生物免疫学教研室,太原,0300014.山西医科大学微生物免疫学教研室,太原,0300015.山西医科大学微生物免疫学教研室,太原,030001
摘要：目的 构建H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽的真核表达载体并检测其在293T细胞中的表达,并鉴定疫苗抗肿瘤效应.方法 筛选鉴定H-2Kb限制性WTI蛋白CTL表位9肽,设计并合成肽疫苗核酸序列,插入pUC57载体,经酶切和测序鉴定,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)及pEGFP-N1载体,转染293T细胞,RT-PCR鉴定目的基因的转录,共聚焦显微镜鉴定目的基因的表达.构建pcDNA3.1(+)-WT1免疫小鼠,取小鼠脾细胞进行体外特异CTL杀伤FBL3细胞试验.结果 构建的基因疫苗经测序、双酶切及PCR鉴定确认无误;其携带的目的基因可在293T细胞中表达.免疫小鼠后特异CTL对FBL3杀伤结果高于对照组(P＜0.05).结论 成功构建了H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗,载体疫苗能在真核细胞中成功表达,疫苗特异CTL具有体外杀伤肿瘤细胞功能,为提高WT1肽疫苗的抗肿瘤效应提供了新思路.
关键词：H-2Kb限制性WT1蛋白CTL肽表位基因疫苗
分类号：R730.51(一般性问题)
资助基金：山西省科技攻关项目(20140313011-18)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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