甲壳素亲和层析在人g2型溶菌酶制备中的应用
黄鹏1
李文姝2
谢君3
鲍建瑛1
曹晓娥1
徐一新4
1.上海健康职业技术学院医学基础部,2002372.上海纽约大学文理学部,2001223.复旦大学遗传工程国家重点实验室, 上海,2004334.上海健康职业技术学院生物医药系,200237
摘要：目的 制备甲壳素亲和纯化介质,设计有效的纯化技术路线,对毕赤酵母表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,HLysG2)重组蛋白进行纯化.方法 研究碱化、稀酸处理、碱化时间、碱浓度等各种因素对甲壳素介质性能的影响;对重组毕赤酵母进行甲醇诱导表达,依次采用亲和层析、阴离子交换层析、透析等方法从发酵液上清中纯化HLysG2,对最终纯化产物的纯度使用HPLC进行测定,杀菌活性使用双层琼脂平板扩散法进行测定.结果 经处理后,在常压下甲壳素亲和介质洗脱速度可达4.5 ml/(min· cm2),对HLysG2吸附容量为1.8 mg/ml,总活性的收率为76.5％,得到的HLvsG2纯度＞99.0％,对溶壁微球菌具有杀灭活性.结论 制备的甲壳素亲和介质具有良好性能,以甲壳素亲和层析为中心的纯化方法可有效纯化HLysG2,为规模化制备HLysG2奠定了基础.
关键词：人g2型溶菌酶甲壳素毕赤酵母纯化
分类号：R392-33(医学免疫学)R392.11(医学免疫学)
资助基金：上海市高校青年教师资助培养计划项目(PF-JZ-QT02022016)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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