pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达
安新业1
程艳丽2
孙大康3
孟玮3
李彩玉3
1.滨州医学院附属医院检验科,2566032.滨州医学院附属医院心血管内科,2566033.滨州医学院附属医院临床医学实验室,256603
摘要：目的 构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达特点.方法 用RT-PCR法扩增出TRIM22基因编码序列,克隆至真核表达载体pEGFP-N3,通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定.将pEGFP-N3-TRIM22载体转染293T细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜观察TRIM22-EGFP的表达;通过激光共聚焦,经LysoTracker DeepRed及DAPI分别染色溶酶体及细胞核,观察TRIM22-EGFP在293T细胞的分布特点.结果 经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体.流式细胞仪检测发现,转染细胞中TRIM22-EGFP+细胞约70％左右.荧光显微镜检测发现,TRIM22-EGFP在293T细胞中能以弥散、小斑点或大颗粒团块3种形式存在.激光共聚焦检测发现,在不同的293T细胞中TRIM22-EGFP可分别优势表达于细胞核、细胞浆,或者在胞核及胞浆均有大量表达.结论 TRIM22-EGFP能以弥散、小斑点或大颗粒团块形式分布于细胞核或细胞浆中.
关键词：三基序蛋白22真核表达载体表达特点
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：山东省自然科学基金(ZR2012CM009)山东省科技发展计划(2011YD18015)烟台市科技发展计划(2011078)滨州医学院附属医院青年科研项目(2013QNKYJJ02)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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