氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞
高祥
黄婧
刘钊
骆晨
罗诗樵
1.重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,4000162.重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,4000163.重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,4000164.重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,4000165.重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,400016
摘要：目的 建立氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞的方法,观察该培养方法对扩增后NK细胞的纯度、扩增效率及功能的影响.方法 应用免疫磁珠分选法(MACS)分离得到高纯度的小鼠脾脏CD3-CD49b+ NK细胞,依据添加刺激因子的不同将纯化后的NK细胞分成A组(rmIL-2)、B组(rmIL-2+rmIL-15)和C组(氢化可的松+rmIL-2+rmIL-15)进行体外培养,每3日添加新鲜培养基及细胞刺激因子.采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD3-CD49b+NK细胞纯度;CFSE稀释法检测NK细胞的增殖效率;MTT比色法检测NK细胞杀伤活性;流式细胞术检测NK细胞膜表面CD107a的表达.结果 磁珠分选后NK细胞纯度由分选前的(8.59±1.41)％提高为分选后的(91.60±1.33)％.体外扩增培养15 d后A组扩增的NK细胞纯度降低[(75.02±3.48)％,P＜0.01],B组(85.87±4.79)％和C组(88.04±3.35)％与扩增前相比较无明显差异(P＞0.05).扩增15d后C组NK细胞扩增倍数为(45.06±1.64)倍,显著高于A组(5.28±0.34,P＜0.01)和B组(25.39±3.29,P＜0.05).细胞增殖实验结果表明培养第7天和第14天各组NK细胞增殖指数(PI)分别为A组(2.26±0.81)和(3.27±1.21),B组(4.62±1.45)和(15.82±3.92),C组(6.91±1.34)和(23.66±5.42).培养第7天和第14天NK细胞增殖指数C组＞B组＞A组(P＜0.05).当效靶比为10∶1时,C组扩增后NK细胞肿瘤杀伤率为(81.27±2.32)％,显著高于A组[(37.20±7.32)％,P＜0.01]和B组[(69.51±6.32)％,P＜0.05]扩增后NK细胞.C组(49.32±4.36)％扩增后NK细胞CD107a表达水平显著高于A组[(9.37±1.82)％,P＜0.001]和B组[(28.46±4.21)％,P＜0.01)]NK细胞.结论 氢化可的松联合rmIL-2+rmIL-15培养方案能够有效地体外扩增并活化小鼠NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗应用于临床奠定了实验基础.
关键词：NK细胞分离扩增增殖氢化可的松
分类号：R733.71(造血器及淋巴系肿瘤)R392.4(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(H1006/30972789)重庆市自然科学基金(cstc2013jcyjA10105)重庆市医学科技计划项目(2008-2-02)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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