甲状腺未分化癌人源单链抗体库的构建及筛选
奚级梅
庞华
张森
刘琼
李文波
1.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000162.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000163.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000164.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000165.重庆医科大学附属第一医院核医学科,400016
摘要：目的 构建天然人源甲状腺未分化癌噬菌体单链抗体库并初步筛选出抗甲状腺未分化癌抗体.方法 从甲状腺未分化癌患者癌周淋巴结组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增抗体可变区基因VH和VL基因片段,并分别与相应Linker连接,再通过重叠延伸PCR技术将其拼接组装成scFv基因片段,并引入酶切位点SfiⅠ和NotⅠ.将双酶切后的scFv重组基因片段与噬菌粒栽体pCANTAB-5E连接,产物经化学转化转入大肠杆菌TG1,超感染噬菌体,构建噬菌体单链抗体库.以甲状腺未分化癌细胞(ARO细胞株)为抗原对该抗体库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,并行ELISA鉴定抗体特异性.结果 成功获得约为750 bp的scFv基因.用pUC19标准质粒测定转化效率达到108 cfu/μg,双酶切鉴定scFv基因的阳性插入率为86.4％(19/22).筛选过程中,甲状腺未分化癌单链抗体得到富集,收获率不断提高,第4轮为第1轮的77倍.ELISA结果显示筛选出的抗体能与甲状腺ARO细胞株特异性结合.结论 成功构建了人源甲状腺未分化癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选出具有甲状腺未分化癌细胞特异性的人源噬菌体单链抗体,为进一步放免研究打下基础.
关键词：噬菌体展示技术噬菌体单链抗体甲状腺未分化癌构建筛选
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81071171)重庆市科技计划面上项目(cstc2013jcyja10072)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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