Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能
何云锋
吴小候
唐伟
尹志康
蒲军
张尧
1.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000162.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000163.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000164.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000165.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000166.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,400016
摘要：目的 构建Treg (regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变.方法 设计编码区全长序列引物,HiFi PCR (high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列.胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化pSCV-BsdRFP质粒连接并测序鉴定.将pSCV-BsdRFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒.反复感染4次得到高滴度pSCV-BsdRFP-Foxp3逆转录病毒液.将此高表达逆转录病毒命名为pSCV-BsdRFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株.ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变.结果 HiFiPCR得到编码区全长序列DNA,连接到pSCV-BsdRFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列.pSCV-BsdRFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达.pSCV-BsdRFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达.IL-10和TGF-β表达增强.结论 成功构建Foxp3高表达逆转录病毒pSCV-BsdRFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞.pSCV-BsdRFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能.
关键词：逆转录病毒Foxp3质粒Treg
分类号：R692.5(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：博士点新教师基金(20115503120012)重庆市卫计委基金(2011-2-103)重庆市教委基金(KJ1500207)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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