幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长
郭玲1
章金勇2
刘东1
马博3
王书峰1
倪兵1
李海波4
刘威1
吴玉章1
1.第三军医大学全军免疫学研究所, 重庆,4000382.第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室, 重庆,4000383.北京大学医学部人体解剖与组织胚胎学系,1001914.第三军医大学药学系药物化学教研室, 重庆,400038
摘要：目的 构建幽门螺杆菌黏附素HpaA的原核表达载体,并用纯化的重组HpaA蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的HpaA抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础.方法 用生物信息学方法分析HpaA蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码HpaA蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并pET22b(+)-rHpaA,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态.用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验.结果 成功构建了重组质粒pET22b(+)-rHpaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组HpaA蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24000,HPLC分析纯度达95％;培养出晶形较好的重组HpaA蛋白单晶,大小约70 μm×30 μm× 20 μm,衍射分辨率2.03 A.结论 利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组HpaA蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础.
关键词：幽门螺杆菌HpaA表达纯化晶体生长
分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2012AA02A407)国家自然科学基金(81572810)重庆市基础与前沿研究计划一般项目(CSTC2013JCYJA1037)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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