日本七鳃鳗MIF多克隆抗体的制备及应用
潘雄1
徐玉海2
梁宏芳1
逄越1
李庆伟1
1.116029大连,辽宁师范大学生命科学学院;116029大连,辽宁师范大学七鳃鳗研究中心2.大连医科大学附属第一医院检验科,116029
摘要：目的 以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)类淋巴细胞为研究对象提取总RNA,通过RT-PCR方法获得七鳃鳗MIF基因对其进行生物信息学分析.方法 将MIF基因构建到原核表达载体pET-28a上,诱导表达并纯化MIF蛋白.以可溶表达的MIF蛋白免疫新西兰兔,应用间接ELISA方法和Western blot方法检测多克隆抗体.结果 ELISA检测抗体效价为1:512 000;Westernblot结果显示该多克隆抗体能特异性的结合重组和天然MIF蛋白;流式细胞术分析确定了19.36％的七鳃鳗类淋巴细胞表达MIF分子;激光共聚焦分析技术确定MIF分子主要定位于七鳃鳗类淋巴细胞的细胞浆中.结论 重组MIF蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为七鳃鳗免疫功能方面的相关研究奠定了基础.
关键词：巨噬细胞移动抑制因子日本七鳃鳗原核表达多克隆抗体
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(973;2013CB835304)全国海洋公益项目(201305016)国家自然科学基金(31170353)国家自然科学基金(31202020)辽宁省高等学校杰出青年学者成长计划(LJQ2014117)大连市科技计划(2013E11SF056)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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