流感病毒为载体重组病毒株rHCV/FLU的构建及初步评价
孙芳1
胡雪凇2
任天宇1
段跃强3
王希良3
张绍庚2
杨鹏辉1
1.100039北京,中国人民解放军第三○二医院肝胆外科中心;100071北京,军事医学科学院微生物流行病研究所2.中国人民解放军第三○二医院肝胆外科中心,北京,1000393.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
摘要：目的 构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株rHCV/FLU并对其进行评价.方法 利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,构建重组质粒pNS1-HCV,测序正确的重组质粒pNS1-HCV与PR8的7个重组质粒pHW191-PB2、pHW 192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M转染共培养的COS-1和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株,命名为rHCV/FLU,并通过血凝试验、RT-PCR、Westernblot、电镜观察病毒形态等方法对重组病毒鉴定.接着,重组病毒接种SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化.纯化获得的重组病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0d、14d免疫2次,设置104TCID50、 105TCID50、 106 TCID503个剂量组,初步评价其免疫效果.结果 成功拯救重组病毒株rHCV/FLU,血凝效价(HA)为29-10,病毒滴度Log10(TCID50/md)为6.5.滴鼻免疫小鼠二免后14d取小鼠血清及脾淋巴细胞,3个剂量组针对流感病毒的血抑(HI)效价均值分别为80、640和1 280,初步证明重组病毒株rHCV/FLU在小鼠体内能够产生较强体液免疫和细胞免疫应答反应.结论 成功制备的重组病毒株rHCV/FLU在动物体内具有较好的免疫效果,为新型HCV疫苗的研制提供新的研究策略.
关键词：反向遗传学丙型肝炎病毒重组病毒PR8流感病毒
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81370518)北京市科技新星计划(Z141107001814054)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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