重组相思子毒素B链蛋白的制备与分析
王俊虹1
杨帆
魏茂提2
1.天津市职业与环境危害防制重点实验室武警后勤学院救援医学系部队卫生统计和流行病学教研室,3003092.300309,天津市职业与环境危害防制重点实验室武警后勤学院救援医学系部队卫生统计和流行病学教研室;300309,武警后勤学院军事心理学教研室
摘要：目的 构建、表达和纯化相思子毒素B(ATB)链蛋白并分析其抗原性和毒性.方法 运用密码子优化软件优化ATB基因,合成目的基因亚克隆至原核载体pQE-80L构建表达质粒pQE80L-ATB,转化至E.coliM 15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western blot检测重组蛋白的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行重组蛋白的细胞毒性实验.结果 ATB开放阅读框架全长804 bp,编码268个氨基酸残基;表达工程菌株在30℃、1 mmol/L IPTG,3h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子质量均约为30 000,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达97％以上,Western blot和MTS实验结果表明,目的蛋白能特异性识别抗相思子毒素多克隆抗体且无毒性.结论 重组ATB蛋白实现高表达,具有良好的抗原性,为相关疫苗研究奠定基础.
关键词：相思子毒素B链抗原性生物恐怖
分类号：R136.4(劳动卫生)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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