Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用
丁细霞1
潘玉先2
陈月2
丘立文2
陈满君2
温坤2
郭勇晖2
余楠2
车小燕2
1.510282 广州,南方医科大学珠江医院检验医学部;510515 广州,南方医科大学基础医学院免疫学教研室2.南方医科大学珠江医院检验医学部, 广州,510282
摘要：目的 以Ⅰ型登革病毒(DENV)非结构蛋白1(NS1)为免疫原制备NS1特异性单克隆抗体,建立Ⅰ型登革病毒NS1抗原特异性检测方法,并应用于广东以Ⅰ型登革感染为主的临床血清标本检测.方法 用原核表达的重组登革病毒NS1蛋白和灭活的Ⅰ型登革病毒免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,间接ELISA、免疫荧光和免疫印迹鉴定,获得DENV1NS1特异性单克隆抗体并建立检测方法.结果 共获得26株Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性结合的单抗.通过对26株1型登革病毒NS1蛋白特异性单抗进行多株抗体组合配对,最终筛选出最佳抗体组合.该组合检测DENV1病毒培养上清的检测限为1∶16 384(12.5 pfu/ml),且与其他3个血清型登革病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒均无交叉反应,对500份健康人血清标本检测中,阴性标本497例,临界3例,对发病0～13d的836份临床确诊的登革热患者血清检测的敏感性为85.6％,明显高于qRT-PCR检测体系(66.3％)(P＜0.001),亦明显高于病毒分离诊断率(P＜0.001).结论 成功获得了1组DENV1-NSl蛋白的特异性单克隆抗体,利用该组抗体建立了1种敏感性和特异性更好的只针对DENV1-NS1蛋白的双抗体夹心检测方法,且比其他方法能够覆盖更宽泛的时间范围,该方法可作为登革热早期诊断的工具.
关键词：登革病毒非结构蛋白单克隆抗体
分类号：R446.6(诊断学)
资助基金：广东省自然科学基金(2015A030313268)广东省科技计划(2014A020212492)广东省医学科学基金(A2015135)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息