RIK蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步研究
张朝璨1
邝林林2
蒋望2
陈桂芳3
梁小珍2
1.200444,上海大学生命科学学院;200031,中国科学院上海巴斯德研究所2.中国科学院上海巴斯德研究所,2000313.上海大学生命科学学院,200444
摘要：目的 本研究从MHV68转化得到的小鼠B淋巴瘤细胞中筛选出一种功能尚未明确的蛋白质,暂时命名为RIK.通过对RIK基因克隆、表达和纯化并成功制备其多克隆抗体,并初步探讨其生物学功能,为该蛋白的进一步深入研究奠定基础.方法 通过RT-PCR的方法检测B淋巴瘤细胞系和原代B细胞中的RIK mRNA水平,并扩增出RIK的基因片段,采用基因重组技术构建出RIK的原核表达载体,经诱导表达后,利用镍离子柱亲和纯化出RIK重组蛋白,免疫新西兰大耳兔,制备抗RIK多克隆抗体,ELISA和Western blot检测抗体灵敏度和特异性.最后,通过在过表达鼠源RIK的小鼠NIH3T12细胞中,进行MHV68病毒感染实验,初步确定其生物学功能.结果 RT-PCR检测发现RIK在B淋巴瘤细胞系中mRNA水平高于原代B细胞,并且成功构建人源和鼠源重组表达质粒pET-28a(+)-h/mRIK,实现包涵体形式RIK蛋白的诱导表达纯化和抗体制备,SDS-PAGE和Western blot证实获得的抗RIK多克隆抗体与预期结果一致,能够特异地识别RIK蛋白.同时,研究发现,在小鼠NIH3T12细胞中过表达mRIK蛋白,能够有效的抑制MHV68对该细胞的感染.结论 本研究成功实现了RIK的重组表达、抗体制备,并且发现RIK蛋白对于MHV68的感染具有十分有效的抑制作用,实现了对其功能的初步研究,并且为深入研究奠定了基础.
关键词：RIKRT-PCR重组表达多克隆抗体MHV68感染
分类号：R392.11(医学免疫学)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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