人N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单抗制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
刘诗琴
黄建芳
谈思怡
邵晨晨
向军俭
1.暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室, 广州,5106322.暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室, 广州,5106323.暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室, 广州,5106324.暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室, 广州,5106325.暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室, 广州,510632
摘要：目的 获得人脑钠肽前体N端(NT-proBNP)的高亲和力、高特异性的抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测人血浆中NT-proBNP.方法 通过Discovery Studio4.0软件预测抗原表位,合成其表位肽偶联载体蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗.通过SDS-PAGE、ELISA等方法对获得的抗体性质进行鉴定,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,并对120例临床血液样本中NT-proBNP进行快速检测.结果 获得6株能稳定分泌抗人NT-ProBNP抗体的杂交瘤细胞株,其中4株单抗的腹水型效价高于1×10-6.共筛选出4对能双抗夹心ELISA配对的抗体,其中Ab1与Ab5具有较高的灵敏度和较大的线性范围,其亲和力分别为1.0×1010L/mol与5.9× 109 L/mol,检测线性范围:300～9 600 pg/ml.样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为97.5％(78/80),阴性检出率为100％(40/40).结论 筛选获得1对高亲和力、高特异性的配对抗体,建立了双抗体夹心ELISA的检测方法,亦为新的快速免疫学检测方法的建立奠定了基础.
关键词：人N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)单克隆抗体双抗体夹心ELISA
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家科技攻关计划(2012A080800007)广东省产学研项目(2010B090400426)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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