FOXO1真核表达载体构建及其对TNF-α介导的A549细胞凋亡的影响
赵立媛1
李理2
袁伟锋2
黄文杰1
1.510515 广州,南方医科大学研究生院;510010,广州军区广州总医院呼吸内科2.广州军区广州总医院呼吸内科,510010
摘要：目的 构建FOXO1真核表达质粒,明确FOXO1对TNF-α介导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及其可能存在的调控机制.方法 根据GenBank中人FOXO1CDS序列设计并合成引物,提取A549细胞总RNA,通过RT-PCR获得FOXO1目的基因片段;通过酶切、连接,构建GV230-FOXO1真核表达质粒并进行测序分析鉴定;经鉴定后的表达载体瞬时转染入A549细胞,荧光显微镜及Western blot法检验FOXO1蛋白表达.体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM 2000将本次合成的GV230-FOX01质粒转染入A549细胞,给予10 ng/ml TNF-α刺激24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bim的表达.结果 成功构建GV230-FOXO1荧光真核表达质粒;FOXO1组细胞凋亡率明显高于TNF-α组和阴性对照组(P＜0.05),FOX01组蛋白Bim的表达明显高于TNF-α组和阴性对照组(P＜0.05).结论 FOXO1在TNF-α介导的A549细胞损伤中起促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能为通过上调促凋亡蛋白Bim的表达,从而促进细胞凋亡.
关键词：FOXO1真核表达质粒TNF-αApoptosisBim
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(81200002)国家自然科学基金(81370173)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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