IL-33蛋白及抗IL-33全人源单链抗体的表达、纯化及鉴定
郭夕源1
杨江华2
徐文峰1
邬于川1
袁青1
1.西南医科大学基础医学院免疫学教研室,泸州,6460002.西南医科大学附属口腔医院第二门诊,泸州,646000
摘要：目的 表达IL-33蛋白及抗IL-33全人源天然单链抗体并进行纯化及鉴定.方法 前期采用噬菌体展示技术从文库容量为108的全人源天然抗体文库筛选了抗IL-33全人源单链抗体,并将筛选的抗IL-33基因转入表达载体pLY16中.在前期工作的基础上,进行了以下研究:表达并纯化人IL-33蛋白,将构建的IL-33/PET102/D-TOPO质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达后用Ni-NTA树脂纯化、浓缩再进行SDS-PGE电泳和Western blot验证.将抗IL-33 scFv/pLY16重组质粒转化人大肠杆菌DH5αF’中,应用PCR技术挑选阳性克隆并进行验证,IPTG诱导可溶性表达,Ni-NTA树脂纯化,SDS-PGE电泳和Western blot验证.结果IL-33/PET102/D-TOPO质粒测序结果显示,插入的外源基因为人全长IL-33 cDNA.表达的IL-33融合蛋白相对分子质量为45 000左右.Western blot结果显示表达的蛋白为人IL-33蛋白.对从天然抗体文库中筛选的抗IL-33单链抗体进行测序,结果显示序列大小为750 bp左右,为开放阅读框,各序列之间有个别氨基酸的差异,说明为不同的单链抗体.ELISA结果显示抗IL-33单链抗体与IL-33有一定的结合能力.Western blot结果证实,表达的抗体为抗IL-33抗体.结论 成功表达并纯化了IL-33抗原、抗IL-33全人源天然单链抗体.
关键词：IL-33全人源单链抗体表达
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：四川省科技厅项目(2015JY0218)四川省科技厅项目(LY-96)四川省教育厅创新团队项目(16TD0022)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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