IRF3shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应
涂文娟1
朱彤2
谈志丽2
刘亮明2
1.上海市同济医院消化内科2.南京医科大学附属上海松江中心医院感染科/上海交通大学附属第一人民医院松江分院感染科,201699
摘要：目的 重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响.方法 采用酶切和连接方法构建pAdeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 shRNA质粒;借助AdMaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测.结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入pAdeno-U6-CMV-EGFP质粒Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 mRNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响.结论 成功构建并包装了IRF3shRNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 mRNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响.
关键词：干扰素调节因子3短发夹RNA腺病毒病毒包装RAW264.7细胞
分类号：R575.3(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81070357)国家自然科学基金(30660066)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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