抗人NRP-1单克隆抗体对肝癌HepG2细胞株的生长抑制作用及机制初探
谈文娟1
高春玲1
颜江华2
程小峰1
张蓓蓓1
王笑良1
1.厦门大学附属成功医院放疗科,3610032.厦门大学医学院抗癌研究中心,361000
摘要：目的 研究抗人神经纤毛蛋白-1 (Neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用及其机制.方法 小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 mAb)并用rProteinA亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测抗体的滴度水平.Western blot检测NRP-1 mAb对HepG2细胞的特异性,细胞免疫荧光和流式细胞术检测NRP-1蛋白在肝癌细胞株HepG2上的表达,MTT法检测NRP-1 mAb对HepG2的生长抑制作用,Westem blot检测ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白的表达水平.结果 SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 mAb纯度为95％以上,效价为1×10-6;Western blot检测结果显示NRP-1 mAb可与HepG2细胞膜上的NRP-1蛋白特异性结合.细胞免疫荧光染色结果显示NRP-1定位于HepG2细胞膜,流式细胞术结果显示NRP-1蛋白在HepG2细胞上表达水平较高;MTT法检测结果显示NRP-1 mAb对HepG2细胞有生长抑制作用.Western blot检测到在不同浓度NRP-1 mAb作用下,HepG2细胞裂解液P-ERK1/2、P-Akt蛋白的条带信号逐渐减弱.结论 纯化的NRP-1mAb能抑制HepG2细胞的生长,其抑制作用是通过EGF和HGF信号通路实现的.
关键词：人神经纤毛蛋白-1肝癌NRP-1单克隆抗体生长抑制作用
分类号：R73-36+1(肿瘤学实验研究)R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：南京军区医学科技创新项目(12MA061)南京军区医学科技创新项目(15MS104)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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