甲状腺未分化癌人源单链抗体制备及初步鉴定
刘倩
刘琼
李文波
许璐
周静
刘影
庞华
1.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000162.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000163.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000164.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000165.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000166.重庆医科大学附属第一医院核医学科,4000167.重庆医科大学附属第一医院核医学科,400016
摘要：目的 从大容量甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)人源单链抗体(single chain variable fragments,scFv)库中筛选特异性抗ATC单链抗体并进行生物特性鉴定.方法 对该抗体库进行4轮筛选后,挑取抗ATC阳性克隆感染E.coliHB2151;并用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导该scFv抗体可溶性表达,ELISA法检测其可溶性表达;经HiTrapTM Anti E-tag亲和柱层析纯化抗体;细胞ELISA鉴定可溶性抗体与细胞结合的特异性,分别设置TT细胞、ARO细胞、人肝癌Hep G2细胞及PBS空白对照组,用酶标仪检测各组在450 nm处的吸光度.SDS-PAGE法及Western blot检测抗体的表达和相对分子质量;流式细胞术观察细胞凋亡情况.结果 经4轮筛选后抗体实现了显著富集,并得到了纯化抗体.ELISA结果表明筛选出的抗体与甲状腺未分化癌细胞能够特异性结合.SDS-PAGE和Western blot检测结果显示ATC抗体的相对分子质量约为2.9×104.流式细胞术结果显示ARO细胞经scFv特异性作用后细胞明显凋亡.结论 成功获得抗ATC特异性人源单链抗体,鉴定结果显示抗体活性较好.
关键词：噬菌体人源单链抗体甲状腺未分化癌鉴定
分类号：R392.11(医学免疫学)R736.1(内分泌腺肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81071171)重庆市科技计划面上项目(CSCT2013JCYJA10072)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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