尼罗罗非鱼IgT重链基因的克隆与表达分析
李焕
张武凤
张小萍
1.西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆,4007152.西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆,4007153.西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆,400715
摘要：目的 进一步了解尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构和功能.方法 通过RACE技术得到IgT cDNA全长,从mRNA水平检测其在不同发育时期和不同组织中的表达情况,并通过qPCR检测在嗜水气单胞菌刺激情况下IgT和IgM的免疫应答规律,构建重组表达载体体外表达部分恒定区序列并制备单克隆抗体.结果 克隆得到全长为1 759 bp的cDNA序列,编码506个氨基酸,表达重组蛋白,纯化得到目标蛋白,并获得CH3的单克隆抗体.RT-PCR结果显示,IgT在受精后的第8天即可检测到,IgT在4月龄鱼头肾和脾脏中表达,在6月龄鱼中,除在以上2个组织中表达之外,在皮肤、肠、鳃、卵巢和精巢中也可检测到.嗜水气单胞菌刺激后,qPCR结果显示:IsT和IgM在头肾、肾、脾脏、肠、鳃和皮肤中均有不同程度的上调.结论 克隆得到尼罗罗非鱼IgT重链cDNA序列并成功制备了单克隆抗体,为免疫球蛋白及其免疫系统的研究奠定了基础.
关键词：尼罗罗非鱼IgT蛋白表达单克隆抗体嗜水气单胞菌
分类号：Q813.2(细胞工程)
资助基金：西南大学基本科研业务费专项资金(XDJK2012C082)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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