小鼠干扰素epsilon在大肠杆菌中的可溶性表达
谢秋波1
常秋霜2
周鹏1
崔丽伟3
郭玲3
刘威3
张庆华2
卢根生1
1.第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所,重庆,4000382.大坪医院妇产科,4000423.大坪医院全军免疫学研究所,400042
摘要：目的 构建小鼠干扰素epsilon蛋白的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得稳定的可溶性重组蛋白.方法 将目的基因克隆到表达载体pET28a-SUMO,与能同时表达3个分子伴侣groES、groEL和tig的质粒pG-tf2一起转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.通过Ni-NTA亲和层析柱、Desalting柱、Q-HP柱及Superdex75分子筛层析经行纯化后,用Ulpl酶切,并对目标蛋白进行质谱分析.对目标蛋白抑制肿瘤细胞增长活性、刺激细胞产生抗病毒蛋白的活性进行鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET28a-SUMO-IFN-ε和分子伴侣共表达,获得较多可溶性蛋白.目标蛋白酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组IFN-ε蛋白表观相对分子质量为22 000.质谱分析证实目标蛋白的序列和小鼠IFN-ε的序列吻合.小鼠IFN-ε能够抑制肿瘤细胞的生长并能诱导细胞产生抗病毒蛋白MxA.结论 小鼠IFN-ε蛋白可以和分子伴侣一起在原核系统中以可溶形式表达,并证明此蛋白具有生物学活性.
关键词：干扰素分子伴侣原核表达可溶蛋白纯化
分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)
资助基金：国家自然科学基金(81270845)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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