小鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学活性评价
王冠英
李斌
李紫薇
幸海燕
陈剑鸿
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所药学部,重庆,4000422.第三军医大学大坪医院野战外科研究所药学部,重庆,4000423.第三军医大学大坪医院野战外科研究所药学部,重庆,4000424.第三军医大学大坪医院野战外科研究所药学部,重庆,4000425.第三军医大学大坪医院野战外科研究所药学部,重庆,400042
摘要：目的 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体,并对其生物阻断活性进行评价.方法 利用重组人源PD-1/PDCD1蛋白作为免疫蛋白,免疫接种Balb/c小鼠,分离并提取小鼠脾淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合培养,经过多次克隆化培养筛选出稳定分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株.鉴定单抗IgG类别及亚类,并分析其特异性和细胞毒性;建立HepG2细胞和Jurkat细胞共同培养体系,ELISA法检测PD-1单抗对Jurkat细胞分泌抗肿瘤细胞因子的影响,MTT法分析PD-1单抗对Jurkat细胞杀伤HepG2细胞能力的影响.结果 获得了1株新的小鼠抗人PD-1单克隆抗体,命名为2H7.单抗2H7能够特异性识别T细胞表面的PD-1蛋白;高浓度长时间处理对Jurkat细胞有一定毒性作用;低浓度单抗2H7可阻断PD-1/PD-L1信号通路,使Jurkat细胞对HepG2细胞杀伤能力显著增强(P＜0.01),且Jurkat细胞分泌的IL-2和IFN-γ等细胞因子水平显著高于对照组(P＜0.01).结论 成功制备了1株具有良好生物阻断活性的小鼠抗人PD-1单克隆抗体2H7,该抗体能够显著提高T细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤能力.
关键词：程序性死亡受体1单克隆抗体生物学活性
分类号：R392.5(医学免疫学)R967(药理学)
资助基金：国家自然科学基金(81273608)重庆市基础科学与前沿技术研究重点项目(CSTC2015jcyjBX0018)第三军医大学科技成果转化项目(2015XZH19)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 354-359 )
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